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无血清传代培养
点击次数:304 发布时间:2018-07-05

无血清传代培养

黏附因子:如果除掉血清,就必须直接在培养基中加入25-50ug/ml的粘连蛋白或1-5ug/ml的层粘连蛋白用以处理塑料培养器皿的生长表面.用1mg/ml的多聚L-融赖氨酸预处理塑料培养器皿,可增强人类二倍体成纤维细胞的存活率.

蛋白酶抑制剂:利用胰蛋白酶进行传代培养后,加入血清可抑制剩余的蛋白水解酶的活性,所以用无血清培养基进行传代培养时必须在无血清培养基中加入如大豆胰蛋白酶抑制剂或0。1mg/ml的牛胰蛋白酶抑制剂等蛋白酶抑制剂。由于粗制胰蛋白酶是由多种蛋白酶组成的复杂的混合物,其中不同的成分需要不同的抑制剂,因而建议用纯的胰蛋白酶及其对应的胰蛋白酶抑制剂。否则就要用离心的方法洗涤细胞以去除胰蛋白酶。在无血清条件下链蛋白酶有可能通过被稀释而失活,不存在一系列的中和作用。

胰蛋白酶和其他蛋白酶:用胰蛋白酶处理无血清培养基培养的细胞时,需要特别注意,因为细胞易碎,可能需要使用纯化的结晶胰蛋白酶以及降低胰蛋白酶的温度以减少细胞的损伤.选择蛋白酶的种类可以避免动物蛋白来源的物质存留于细胞.用重组的胰蛋白酶可代替提纯的prorcine。非哺乳动物蛋白酶也可选用蛋白酶。解离酶,胶原酶是细菌的蛋白酶,不能用胰酶抑制剂使其失活,可能需要用离心的方法去除。在没有使酶失活的无血清条件下,可以用稀释的方法使Pronase失活。蛋白酶是非常有效的,但对一些细胞有毒性。如果有上皮细胞存在,用Dispase和胶原酶消化时,不能得到单细胞悬液。

 


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