当前位置:
秒速赛车 > 技术文章 > Na+K+- ATP酶活性测定说明书(分光光度法)
目录导航 Directory
服务热线
技术支持Article
Na+K+- ATP酶活性测定说明书(分光光度法)
点击次数:127 发布时间:2019-04-18

Na+K+- ATP酶活性测定说明书(分光光度法)

货号:YJ2218

规格:100管/48样

产品简介:

Na+K+- ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中,可催化ATP水解生成ADP和无机磷。

Na+K+-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷,通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性。

自备的仪器和用品

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板跑、研钵、冰和蒸馏水。

产品内容:

提取液:液体100mL×1 瓶,4保存。

试剂一:液体 10mL×1 瓶,4保存。

试剂二:粉剂×1-20保存;临用前加入6ml蒸馏水充分混匀待用;用不完的4保存一周

试剂三:液体 2ml×1 瓶,4保存。

试剂四:粉剂×1瓶4保存。用时加入3mL蒸馏水4保存

试剂五:粉剂×1 瓶,4保存。用时加入25ml蒸馏水,溶解后4保存一周

试剂六:粉剂×1 瓶,4保存。用时加入25ml蒸馏水,溶解后4保存一周。

试剂七液体25ml×1,室温保存。

试剂10mmol/L 标准磷贮备液 10mL×1 瓶,4保存。

0。5μmol/mL 标准磷应用液配制:试剂八 20倍稀释,即取 0.1mL试剂1。9mL蒸馏水充分混匀。

定磷剂的配制:按H2O:试剂:试剂:试剂=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,定磷剂现用现配。

注意:配试用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。

样品酶液的制备:

  1. 细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

  1. 血清(浆)样品:直接检测。

操作步骤

  1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至660nm,蒸馏水调零。
  2. 酶促反应(在EP管中加入下列试剂)

 

对照管

测定管

试剂一(μL

65

45

试剂二(μL

60

60

试剂三(μL

40

20

样本μL

40

100

混匀,37(哺乳动物)或25(其他物种)准确水浴10min

试剂μL

25

25

μL

100

 

混匀,8000g,常温离心10min,取上清液

  1. 定磷(EP或96孔板中依次加入下列试剂)

 

空白管

标准管

A

B

0.5μmol/ml标准磷应用液(μL

 

20

 

 

上清液(μL

 

 

20

20

蒸馏水(μL

20

 

 

 

定磷试剂(μL

200

200

200

200

混匀,室温放置30min,在 660nm,记录各管吸光值。

注意:

  1. 由于每一个样都必须做对照,本试剂盒100管保证测48Na+K+-ATP酶。
  2. 此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要求严格无磷。
  3. 空白管和标准管只要做一管。

计算

  1. 血清(浆)Na+K+- ATPase活力的计算:

定义:规定每小时每毫升血清(浆)中Na+K+- ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。

Na+K+-ATP酶活力(U/mL= C标准管×V总)×A测定管-A对照管)÷A标准管-A空白管)÷V÷T

=7.5×A测定管-A对照管)÷A标准管-A空白管)

  1. 组织、细菌或细胞中Na+K+- ATPase活力的计算:
  1. 按蛋白浓度计算:

定义:规定每小时每毫克组织蛋白中Na+K+- ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。

Na+K+-ATP酶活力(U/mg)= C标准管×A测定管-A对照管)÷A标准管-A空白管)×V÷Cpr×V样)÷T =7.5×A测定管-A对照管)÷A标准管-A空白管)÷Cpr

  1. 按样本鲜重计算:

定义:规定每小时每克组织中Na+K+-ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。

Na+K+-ATP酶活力(U/g)= C标准管×A测定管-A对照管)÷A标准管-A空白管)×V÷(V÷V样总×W)÷T=7.5×A测定管-A对照管)÷A标准管-A空白管)÷W

  1. 按细菌或细胞密度计算:

定义:规定每小时每1万个细菌或细胞中Na+K+-ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。

Na+K+-ATP酶活力(U/104)= C标准管×A测定管-A对照管)÷A标准管-A空白管)×V÷(V÷V样总×500)÷T=0。015×A测定管-A对照管)÷A标准管-A空白管)

C标准管:标准管浓度,0.5μmol/mLV总:酶促反应总体积,0。25mLV样:加入样本体积,0。1mL V样总:加入提取液体积,1mLT:反应时间,1/6小时;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本鲜重,g500:细菌或细胞总数,500万。

 

联系人
在线客服
用心服务成就您我
秒速赛车注册 秒速赛车网站 秒速赛车下载 秒速赛车计划 秒速赛车网站 秒速赛车是真的吗 秒速赛车网站 秒速赛车登陆 秒速赛车官方网站