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总抗氧化能力试剂盒说明书
点击次数:37 发布时间:2019-10-23

货号:YC1205                                                   规格:100管/96样

 

总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)试剂盒说明书

微量法

 

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

研究意义:

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

测定原理:

在酸性环境下,还原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映了总抗氧化能力。

自备实验用品:

恒温水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100mL×1 瓶,使用前预冷。

试剂一:液体 15mL×1 瓶,避光保存。

试剂二:液体 1。5mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体 1.5mL×1 瓶,避光保存。

混合液(现配现用):将试剂一、试剂二、试剂三按10:1:1的比例混合,使用前37℃预温。

样品的制备:

(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品

血浆(制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝,不宜使用EDTA抗凝)4℃,5000rpm 离心10min,取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定,也可以-80℃冻存(不宜超30d)后再测定。

(2) 组织样品

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

(3) 细胞样品

按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎(功率200W,超声3s,间隔10s,重复30次);10000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

操作步骤:

1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至593nm,蒸馏水调零。

 

 

 

 

 

2、操作表

 

空白管

测定管

混合液(μL)

180

180

样品(μL)

 

6

双蒸水(μL)

24

18

充分混匀,反应10min,于微量石英比色皿/96孔板,测定593nm吸光值,△A= A测定-A空白

注意:空白管只需测定一次。

总抗氧化能力计算公式:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y=0.6308x+0.1291,R2=0.9989

(1)按样本质量计算

总抗氧化能力(U/g)=(△A-0.1291)÷ 0.6308×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)

=53.9×(△A-0.1291)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算

总抗氧化能力(U/mg prot)=(△A-0.1291)÷0.6308×V 反总÷(V 样×Cpr)

=53.9×(△A-0.1291)÷Cpr

(3)按细胞计算

总抗氧化能力(U/104cell)=(△A-0.1291)÷0.6308×V反总÷V样×V样总÷细胞数量(万个)= 53.9×(△A-0.1291)÷ 细胞数量(万个)

(4)按液体体积计算

总抗氧化能力(U/mL)=(△A-0。1291)÷0。6308×V 反总÷V 样= 53。9×(△A-0。1291)

V 样总:加入提取液体积,1 mL; V 反总:反应总体积,204μL;V 样:反应中样品体积,

6μL;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL

b。用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y=0.3154x+0.1291;R2=0.9989

(1)按样本质量计算

总抗氧化能力(U/g)=(△A-0。1291)÷0。3154×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)

=107。8×(△A-0。1291)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算

总抗氧化能力(U/mg prot)=(△A-0。1291)÷0。3154×V 反总÷(V 样×Cpr)

=107.8×(△A-0.1291)÷Cpr

(3) 按细胞计算

总抗氧化能力(U/104cell)=(△A-0。1291)÷0。3154×V反总÷V样×V样总÷细胞数量(万个)= 107。8×(△A-0。1291)÷ 细胞数量(万个)

(4)按液体体积计算

总抗氧化能力(U/mL)=(△A-0.1291)÷0.3154×V 反总÷V 样= 107.8×(△A-0.1291)

V 样总:加入提取液体积,1 mL; V 反总:反应总体积,204μL;V 样:反应中样品体积,

6μL;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL

 

 

注意事项:

1. 试剂二对人体有刺激性,请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴乳胶手套操作。

2. 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂,否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。

3. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。

4。 如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外,需把样品适当稀释或浓缩后再进行测定。

5. 试剂盒 2-8℃保存。

 

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