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EASYspin 组织/细胞RNA快速提取试剂盒
点击次数:67 发布时间:2019-10-29

EASYspin 组织/细胞RNA快速提取试剂盒

EASYspin RNA Rapid Tissue and cell Kit

 

 

 

保存条件:本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

产品介绍:

独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞 RNA 酶,然后用乙醇调节结

合条件后,RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的 RNase free H20 将纯净 RNA 从硅基质膜上洗脱。

自备试剂:乙醇, β-巯基乙醇

注意事项:

1。需要自备一次性注射器,研钵。RA105 EASYspin  组织 细胞RNA快速提取试剂盒

-MBI2.裂解液RLT 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。

 

3.关于DNA 的微量残留:

一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留,本公司的EASYspin 系列RNA 提取产品,在大多数 RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA 残留(一般电泳 EB 染色紫外灯下观察不可见)影响不是很大, 如果要进行严格的

mRNA 表达量分析如荧光定量 PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:

1) 选用跨内含子的引物,以穿过 mRNA 中的连接区,这样 DNA 就不能作为模板参与扩增反应。

2) 选择基因组DNA cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。

操作步骤:

提示:

 第一次使用前请先在漂洗液 RW 瓶和 70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇!

 操作前在裂解液RLT 中加入β-巯基乙醇至终浓度 1%,如 1 ml RLT  中加入 10μl β-

巯基乙醇。此裂解液建议现用现配。配好的 RLT 4℃可放置一个月。

1. 组织培养细胞

a。 收集<107 悬浮细胞到一个 1.5ml 离心管,对于贴壁细胞,孔板培养可以直接裂解, 细胞瓶培养应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。

b. 2,000rpm 离心 10 sec(或者 300g 离心 5 min),使细胞沉淀下来。完全吸弃上清,留下细胞团,注意不完全弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。

c. 轻弹管壁将细胞沉淀完全松散重悬, 加入 350μl<5x106 细胞) 或者 600μl

5x106-1x107 细胞)裂解液RLT,吹打混匀后用手剧烈振荡 20 sec,充分裂解。

d. 用带钝针头的一次性 1ml(0.9mm 针头) 注射器抽打裂解物 5-10 次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆 30 sec),可以剪切 DNA,降低粘稠度和提高产量。

e. 操作步骤项下 3。

2. 动物组织(例如鼠肝脑)

a。 电动匀浆: 新鲜组织用解剖刀迅速切成小碎块, 加入 350μl(<20mg 组织) 或者

600μl(20-30mg 组织)的裂解液RLT 后电动彻底匀浆 20-40 sec。

b. 液氮研磨+匀浆:在液氮中研磨组织成细粉后,取适量组织细粉(20mg/30mg)转入 装有 350μl/600μl 组织裂解液 RLT 1.5ml 离心管中,  用手剧烈振荡 20 sec,充分裂解。用带钝针头的一次性 1 ml(0.9mm 针头)  注射器抽打裂解物 10  次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30 sec),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。

c。 将匀浆后裂解物 12,000rpm 离心3 min,沉淀可能存在的裂解困难的碎片或者不溶物,

将裂解物上清小心转到一个新离心管。

 

d. 操作步骤项下 3

3. 较精确估计裂解物(上清)体积,加入等体积的 70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇!,此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。

4. 立刻将混合物(每次小于 700μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱 RA 中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm 离心 60 sec,弃掉废液。

5。 350μl 去蛋白液 RW1,室温放置 30 sec12,000rpm 离心 30 sec,弃掉废液。将吸附柱 RA 放回收集管中。

6。 DNaseI 工作液的配制:取 10μl DNaseI 储存液放入新的 RNase-free 离心管中,加入70μl RDD 溶液,轻柔混匀。

7. 向吸附柱 RA 中央加入 80μl DNaseI 工作液,室温放置 15 min(一般情况下室温放置可得到较好的消化效果,如果室温效果不佳可选择在 37℃放置 15 min)。

8。 350μl 去蛋白液 RW1,室温放置 30 sec12000rpm 离心 30 sec,弃掉废液。将吸附柱 RA 放回收集管中。

9. 加入 500μl 漂洗液 RW(请先检查是否已加入无水乙醇!,12,000rpm  离心 30 sec,弃掉废液。加入 500μl 漂洗液 RW,重复一遍。

10。 将吸附柱 RA 放回空收集管中,12,000rpm 离心 2 min,将吸附柱置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

11. 取出吸附柱 RA,放入一个 RNase free 离心管中,根据预期 RNA 产量在吸附膜的中间部位30-50μl RNase free water  事先在65℃水浴中加热效果更好),室温放置1 min,

12,000rpm 离心 1 min

 

                        

                           

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