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ELISAS实验抗原的摄取
发布时间:2013-11-19 点击次数:465次

ELISAS实验抗原的摄取

 

(1) 抗原的摄取  任何血清学试验都依赖于具有价、特异性强的抗血清的产生,而抗血清的制备离不开抗原的收集、保存和提取。采回的害虫饥饿24h后,将等体积的磷酸缓冲液(PBS)滴入备用的害虫中,研磨后加入过量的PBS(PH=7.4),在4℃下搅拌24h,然后以4000-5000r/min的速度离心20h,分离上清液。沉渣用上法重复抽提一次。

 

将两次所得的上清液混合后,置于4℃下更换多次冷盐水透析24h或48h。透析液用冰冻干燥法或反透析法进行浓缩。浓缩液用紫外分光光度计测定蛋白质含量,得到适当浓度的蛋白质溶液即位抗原。

 

  抽提过程中应注意:①所有的处理都需在低温(4℃)下进行,以防蛋白质变性:②若抗原溶液需保存较长的时间,则需加防腐剂(如NaN3)或在冻干状态下保存:③为制备特异性强的抗血清,抗原可用标准的生化技术进行纯化:④如一次不能收集足够的抗原,可将每次的虫体保存在-20℃或将抗原冻干直到积累足够的量。

 


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