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ELISAS实验血清的制备
发布时间:2013-11-19 点击次数:474次

ELISAS实验血清的制备

(2)抗血清的制备

 ① 所需的抗原量   一般1-10mg/mL。

②免疫途径   抗原的注射方法有皮下注射、肌肉注射、腹膜内注射、静脉注射和淋巴结注射等。其中以静脉注射zui为简单方便,不需要佐剂乳化,产生抗体的高峰值出现较早,一般在一周左右,注射后一周即可采血测试效价。免疫过程中应注意:a.佐剂只能现配现用:b.采血时间不宜拖得太长。因为免疫时间越长,产生交叉反应的抗体也越多。

③抗血清的分离   当得到满意的效价时,即可进行取血。将收集到的血液成斜面放置在37℃、温箱中2h。然后置于4℃冰箱过一夜。次日用滴管吸取抗血清,用离心法(2000-3000r/min,20min)去掉沉淀。然后测定效价、鉴定纯度。纯度用紫外分光光度计或Folin氏比色法进行测定。抗血清保存于-25℃低温处。

 ④抗血清的效价测定    测定的方法一般有两种,即试管沉淀法和免疫双扩散法。对于免疫酶技术使用的抗血清,必须具有一定的效价,试管沉淀法应不低于1:2,免疫双扩散法不低于1:2,且要求单价抗血清。

 (3)捕食者的收集和准备     主要方法有3个:①将胃内含物挤在质量好的滤纸上,但蛋白质易与纤维素结合,若保存过久则难以洗脱:②将待检查的捕食封闭在明胶胶囊内,并加干燥剂,以使虫体与胶囊分离:③尽可能快地将采集到的捕食者储存于低温下(如-40℃)。前两种方法适于邮寄和长途运输,后一种方法能保存较长的时间。所有的方法都需保持干燥。对较大的捕食者,可将消化道分离,像蚁、蜗牛以及蜘蛛等小型动物则整个虫体。(4)酶联抗体的制备  按戊二醛简易法进行。


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