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糖原含量试剂盒说明书
更新时间:2019-04-18
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所属分类:其他
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糖原含量试剂盒测定原理:
蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原,在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。

糖原含量试剂盒说明书产品概述:

货号:YC1131                                                 规格:100管/96样

糖原含量试剂盒说明书

微量法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖,是糖的主要的储存形式之一,主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量,分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度,当血糖升高时可在肝

脏合成糖原,血糖降低时,肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此,肝糖原对维持血糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时,肌糖原不能直接分解成血糖,必须先分解产生乳酸,随血液循环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。

测定原理:

蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原,在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、浓硫酸(不允许快递)和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:0.1mg/mL 的葡萄糖标准液 10mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶, 4℃保存;

糖原提取:

1﹑细胞或细菌:收集500~1000万细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;加入0.75mL提取液超声波破碎细菌或细胞(功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);转移至10mL试管中,95℃水浴20min(盖紧,防止水分散失),隔5min振摇试管1次,使充分混匀;取出试管冷却后,用蒸馏水定容到5ml,混匀,8000g 25℃离心10min,取上清液待测。

2﹑组织:称取0.1~0.2g样品,加入0.75ml 提取液充分匀浆;转移至10ml试管中;95℃水浴 20min(盖紧,防止水分散失),隔5min振摇试管1次,使充分混匀;待组织全部溶解后,取出试管冷却后,用蒸馏水定容到5ml,混匀,8000g 25℃离心10min,取上清液待测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至620nm,蒸馏水调零。

2、调节水浴锅至95℃。

3、试剂二工作液的配制:在试剂二中倒入6mL蒸馏水,缓慢倒入24mL浓硫酸,充分溶解混匀后使用;用不完的试剂4℃保存一周;

4、加样表(在 EP 管中反应) :

试剂(μL)

空白管  

标准管  

测定管

待测样本  

 

 

60

试剂一

 

60

 

蒸馏水  

60

 

 

试剂二  

240  

240  

240

混匀,置95℃水浴10min(盖紧,防止水分散失),冷却,取200μL转移至微量石英比色皿或 96孔板中,于620nm波长处,分别读取空白管、标准管和测定管吸光度,分别记为 A1、A2 和 A3。

注意:1、空白管和标准管只要测一次。

2、如果 A3-A1大于2,需要将样本用蒸馏水稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。

糖原含量的计算:

1、按照样本质量计算

糖原(mg/g 鲜重)=1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)

= 0.555×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W

2、按照蛋白质含量计算

糖原(mg/mg prot)=1。11×(C 标准×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)

=0。111×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷Cpr

1。11:是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数,即 111ug 糖原用蒽酮试剂显色相当于

100ug 葡萄糖用蒽酮所试剂显示的颜色;C 标准管:标准管浓度,0.1mg/mL;V1:加入反应体系中待测样本体积,0.06mL;V2:加入提取液体积,5mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。

注意:最低检测限为 10ng/g  鲜重或 0.1ng/ mg prot 。

 

葡萄糖含量试剂盒说明书(测组织、细菌或细胞)

 

 

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